瑞香狼毒根大環(huán)二萜類化合物通過STAT 1/S100 A9信號通路減輕咪喹莫te誘導(dǎo)的銀屑病樣炎癥

各位讀者好，今天為大家?guī)硪黄褂谜暇W(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)、分子對接、細胞熱轉(zhuǎn)移測定 （CETSA）、藥物親和力響應(yīng)靶點穩(wěn)定性（DARTS）、表面等離子共振（SPR）等策略來研究瑞香狼毒乙酸乙酯提取物（SA）在銀屑病中的作用、潛在靶點和機制的高分文章，是由上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬岳陽中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院和福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院團隊2025年4月在Br J Pharmacol發(fā)表的，題為“Macrocyclic diterpenoids from Stellera chamaejasme roots alleviate imiquimod‐induced psoriasiform inflammation via STAT1_S100A9"。發(fā)現(xiàn)荷葉瑞香狼毒乙酸乙酯提取物stellchamain A（SA）可改善咪喹莫te誘導(dǎo)的銀屑病樣癥狀，為銀屑病治療提供了新的潛在藥物。

發(fā)表雜志：

《British Journal of Pharmacology》（《英國藥理學(xué)雜志》，簡稱Br J Pharmacol）是國際藥理學(xué)領(lǐng)域的權(quán)wei期刊之一，主要發(fā)表藥理學(xué)基礎(chǔ)研究和轉(zhuǎn)化研究的高質(zhì)量成果。由英國藥理學(xué)會（British Pharmacological Society）于1946年主辦，具有悠久的學(xué)術(shù)歷史。

2024 年影響因子：7.7 

ISSN：1476-5381

中科院分區(qū)：在中科院最新升級版分區(qū)表中，大類學(xué)科為醫(yī)學(xué) 2 區(qū)，小類學(xué)科藥學(xué)也為 2 區(qū)。

發(fā)文量：根據(jù)科研通數(shù)據(jù)顯示，其每年出版文章數(shù)約為 344 篇。另外，在 2023-2024 年期間，發(fā)文量較多的機構(gòu)有倫敦大學(xué)（90 篇）、諾丁漢大學(xué)（68 篇）等，發(fā)文量較多的國家是英國（406 篇）。

發(fā)表成本：非開放獲取（OA）方式無版面費，若選擇開放獲取出版，OA 費用為 4200 美元，約合人民幣 26675 元。

審稿周期：審稿周期一般為 2-6 個月左右，具體時間因稿件情況而異。

《British Journal of Pharmacology》憑借其悠久的歷史、嚴(yán)格的審稿標(biāo)準(zhǔn)和廣泛的學(xué)科覆蓋，成為藥理學(xué)領(lǐng)域研究者發(fā)表高質(zhì)量成果的重要平臺。無論是基礎(chǔ)機制探索還是藥物開發(fā)研究，該期刊都為推動全球藥理學(xué)發(fā)展發(fā)揮著關(guān)鍵作用。

研究背景：

銀屑病是一種多系統(tǒng)炎癥性疾病，影響患者生活質(zhì)量，現(xiàn)有免疫治療藥物存在副作用等問題。瑞香狼毒是傳統(tǒng)中藥，對治療銀屑病有潛在效果，其含有的二萜類化合物具有多種藥理活性。此前研究發(fā)現(xiàn)瑞香狼毒乙酸乙酯提取物可抑制角質(zhì)形成細胞活力，本研究旨在分離鑒定其化合物，探究瑞香狼毒乙酸乙酯提取物stellchamain A（SA）治療銀屑病的作用機制，為瑞香狼毒治療銀屑病提供科學(xué)依據(jù)。

    本文從瑞香狼毒根部分離出10種二萜類化合物，其中新化合物stellchamain A（SA）表現(xiàn)出顯著的抗銀屑病活性。研究通過體外細胞實驗和體內(nèi)小鼠模型，證實SA能抑制IL - 17A誘導(dǎo)的細胞增殖和凋亡，減輕咪喹莫te誘導(dǎo)的銀屑病樣癥狀。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子生物學(xué)研究表明，SA通過IL - 17A/STAT1/S100A9信號通路發(fā)揮作用，為銀屑病治療提供了新的潛在藥物。

研究框架：

1. 提出問題

基于銀屑病現(xiàn)狀及瑞香狼毒治療潛力，提出探究SA治療銀屑病機制的問題。

2. 研究框架

體外研究SA對IL - 17A處理的HaCaT細胞的作用，體內(nèi)用咪喹莫te誘導(dǎo)銀屑病小鼠模型評估SA效果，結(jié)合網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)等方法探究作用機制。

3. 研究方法

采用柱色譜分離化合物，NMR鑒定結(jié)構(gòu)，CCK - 8和TUNEL等檢測細胞活性和凋亡，用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)、SPR等研究SA與靶點相互作用。

4. 分析數(shù)據(jù)

用Prism 8.4軟件進行單因素或雙因素方差分析，以p < 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

5. 得出結(jié)論

研究發(fā)現(xiàn)SA能靶向結(jié)合STAT1并影響其在Ser727位點的磷酸化，從而減少下游S100A9轉(zhuǎn)錄，抑制細胞增殖并誘導(dǎo)凋亡。在體內(nèi)SA可使T細胞亞群恢復(fù)平衡，減少炎癥細胞浸潤，改善免疫微環(huán)境，緩解銀屑病癥狀，為SA作為銀屑病潛在治療藥物提供了科學(xué)依據(jù)。

潛在機制示意圖

結(jié)果解析：

1. 瑞香狼毒中化合物1-10分離及其活性篩選

化合物分離鑒定：從瑞香狼毒中分離出10種二萜類化合物，包括新化合物SA（1）和9種已知化合物（2 - 10），并對SA進行了詳細的結(jié)構(gòu)鑒定，包括其平面結(jié)構(gòu)、相對構(gòu)型和絕對構(gòu)型。

細胞活性篩選：評估了這些化合物對IL - 17A處理的HaCaT細胞活力和凋亡的影響。結(jié)果顯示SA對IL - 17A誘導(dǎo)的HaCaT細胞增殖具有最佳抑制活性，且呈劑量依賴性地誘導(dǎo)細胞凋亡。

2. SA改善IMQ誘導(dǎo)的銀屑病樣皮膚病變

體內(nèi)治療效果：在IMQ誘導(dǎo)的小鼠銀屑病模型中，SA能改善銀屑病樣皮膚病變，表現(xiàn)為紅斑變淡、皮膚變光滑、鱗屑減少。

病理特征改善：PASI評分表明SA具有良好的治療效果。H&E染色顯示SA可減少表皮增厚、角化不全和血管周圍炎癥細胞浸潤。IHC分析顯示SA處理組中Ki67、ICAM - 1和IL - 17陽性角質(zhì)形成細胞數(shù)量明顯低于模型組，高劑量SA組效果優(yōu)于陽性對照組CAL。

3. IHF染色證實SA對T細胞亞群的調(diào)節(jié)

T細胞亞群調(diào)節(jié)：IHF染色結(jié)果顯示，SA組中CD3/CD4、CD3/CD8、FOXP3/CD4和IL - 17A/RORγ細胞的比例明顯低于模型組，表明SA可調(diào)節(jié)T細胞亞群平衡，抑制IMQ誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。

4. SA抗銀屑病作用靶點的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測：通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)SA的靶點與GSE13355數(shù)據(jù)集中的差異表達基因有顯著重疊，S100A9、STAT1和LCN2得分較高，提示SA可能通過靶向這些基因發(fā)揮治療作用。

信號通路和免疫浸潤：GO和KEGG分析表明SA主要影響先天免疫反應(yīng)，作用于IL - 17信號通路。預(yù)測STAT1是調(diào)節(jié)S100A9轉(zhuǎn)錄的轉(zhuǎn)錄因子，分子對接顯示SA可與STAT1結(jié)合。免疫浸潤相關(guān)性分析表明STAT1和S100A9與多種免疫細胞相關(guān)，推測SA通過結(jié)合STAT1抑制S100A9轉(zhuǎn)錄，影響下游免疫浸潤。

5. SA通過阻斷STAT1和S100A9抑制HaCaT細胞分化

信號通路驗證：通過多種實驗驗證了SA通過IL - 17A/STAT1/S100A9信號通路抑制促炎細胞因子的表達。Luciferase報告基因?qū)嶒灡砻鱏TAT1可結(jié)合S100A9的啟動子區(qū)域，促進其轉(zhuǎn)錄。

直接結(jié)合驗證：SPR分析顯示SA與STAT1的KD值為9.24 nM，DARTS和CETSA實驗進一步證實SA與STAT1直接相互作用。WB和IFC實驗表明SA可直接結(jié)合STAT1，影響下游S100A9表達，抑制IL - 17信號通路的激活，從而減輕炎癥。

6. SA對IL-17 A誘導(dǎo)的HaCaT細胞銀屑病樣皮損的抑制作用與IL-17 A信號通路的調(diào)節(jié)有關(guān)

信號通路變化：WB和IFC實驗驗證了在STAT1 siRNA干擾和SA干預(yù)下，IL - 17信號通路的變化。結(jié)果顯示SA單獨處理可顯著降低S100A9、STAT1、p - STAT1等蛋白的表達水平，而在siSTAT1 + SA組中，這些蛋白水平部分恢復(fù)，表明SA可直接結(jié)合STAT1，影響下游S100A9表達，抑制IL - 17信號通路的激活，減輕炎癥。

7. SA對IMQ誘導(dǎo)銀屑病小鼠T細胞亞群表達的調(diào)節(jié)作用

免疫浸潤調(diào)節(jié)：在IMQ誘導(dǎo)的小鼠銀屑病模型中，SA可減少Th17細胞、濾泡輔助性T細胞、M1巨噬細胞、活化樹突狀細胞和中性粒細胞的浸潤，增加調(diào)節(jié)性T細胞的浸潤，表明調(diào)節(jié)免疫失調(diào)是SA緩解銀屑病的潛在機制。

研究結(jié)論：

SA通過靶向STAT1結(jié)合，減少下游S100A9轉(zhuǎn)錄，抑制細胞增殖和誘導(dǎo)凋亡，重新平衡T細胞亞群，減少炎癥細胞浸潤，改善免疫微環(huán)境，減輕小鼠銀屑病癥狀。

研究的創(chuàng)新性：

發(fā)現(xiàn)新的大環(huán)二萜類化合物SA，具有抗銀屑病特性，明確其靶向STAT1通路及結(jié)合親和力，拓展了治療潛力。

研究的不足之處：

采用急性銀屑病模型，無法評估SA對慢性銀屑病的作用；體內(nèi)實驗劑量不能直接轉(zhuǎn)化為臨床劑量；未驗證SA與STAT1結(jié)合位點；網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)存在不確定性。

研究展望：

后續(xù)可建立慢性銀屑病模型評估SA效果；進一步驗證體內(nèi)劑量用于臨床；明確SA與STAT1結(jié)合位點；結(jié)合其他研究方法減少網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)不確定性；探索SA對其他皮膚疾病的治療作用。

研究意義：

本研究為銀屑病治療提供新的潛在藥物，揭示SA作用機制，為開發(fā)具有免疫調(diào)節(jié)作用的治療策略提供新見解。有望改善銀屑病患者癥狀，提高患者生活質(zhì)量，具有重要的臨床應(yīng)用前景。